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凱氏定氮儀測(cè)定蛋白質(zhì)有哪幾個(gè)步驟呢

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凱氏定氮儀是根據(jù)凱氏定氮法設(shè)計(jì)的用于測(cè)定化合物或混合物中總氮量的一種儀器。使用前需要校準(zhǔn)的項(xiàng)目有空白試驗(yàn)、回收率的測(cè)定、儀器的測(cè)量重復(fù)性。
凱氏定氮儀樣品消化
濃硫酸具有脫水性和氧化性,可使有機(jī)物中的碳、氫被氧化為二氧化碳和水,蛋白質(zhì)會(huì)分化為氨,然后氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。一般參加硫酸鉀和硫酸銅作為催化劑來(lái)加速蛋白質(zhì)分化。硫酸鉀能夠行進(jìn)溶液的沸點(diǎn),一般情況下,純硫酸的沸點(diǎn)在340℃左右,可是在添加硫酸鉀后,可行進(jìn)至400℃以上。行進(jìn)溫度使有機(jī)物加速分化??墒遣荒軈⒓舆^(guò)多的硫酸鉀,不然會(huì)因?yàn)闇囟冗^(guò)高,使生成的硫酸銨發(fā)生熱分化成氨而構(gòu)成丟掉。硫酸銅除作為催化劑外,還能夠指示消化完畢的抵達(dá),有機(jī)物悉數(shù)消化后,溶液呈現(xiàn)清澈的藍(lán)綠色,硫酸銅還能夠做蒸餾時(shí)堿性反響的指示劑。
凱氏定氮儀蒸餾
消化液中的硫酸銨在堿性環(huán)境下會(huì)轉(zhuǎn)化成氨。為避免水中微量的氨氣受熱逸出,影響測(cè)定效果,所以水蒸氣發(fā)生器中的水要堅(jiān)持酸性。硫酸銨是一種強(qiáng)酸弱堿鹽,需求滿足的堿液使結(jié)合態(tài)的氨反響并釋放出來(lái),這個(gè)進(jìn)程中的氫氧化鈉一定要過(guò)量,過(guò)量的氫氧化鈉會(huì)與硫酸銅生成藍(lán)色的氫氧化銅堆積,氫氧化銅受熱分化成黑色的氧化銅堆積。查驗(yàn)蒸餾是否結(jié)束,可用奈氏試紙法,NH4+或NH3遇奈氏試劑會(huì)反響生成棕赤色的銨化合物。
凱氏定氮儀吸收
加熱蒸餾放出的氨可用硼酸溶液吸收,硼酸有吸收氨的效果,又因其呈微小酸性,不影響下一步滴守時(shí)指示劑的變色反響。溫度過(guò)高會(huì)使硼酸吸收液對(duì)氨的吸收效果削弱,然后構(gòu)成丟掉,故一般不逾越40℃。
凱氏定氮儀滴定
待吸收完后,用硫酸或許鹽酸規(guī)范溶液進(jìn)行酸堿滴定,滴定液的濃度直接影響效果的準(zhǔn)確性,有必要按照要求進(jìn)行制作和標(biāo)定?;旌现甘緞┰谥行匀芤褐谐驶疑味ㄍ戤厱r(shí)液體呈灰色。 
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